遺伝子導入 -Nucleofector®-

Nucleofector®における遺伝子導入最適化ストラテジー

ロンザでは150種類以上の細胞タイプにおける最適化された電気プログラムを含む遺伝子導入プロトコルをご用意しています。加えて、1500種類以上の細胞タイプにおけるデータが「導入実績データベース」にて閲覧可能です。もし導入したい細胞のプロトコルのご用意がロンザない場合でも、簡単に目的細胞の最適化プログラムを調べることができます。下記のフローチャートに沿って、目的の細胞における最適化プロトコルや実績が存在するかどうかをご確認下さい。

4D-Nucleofector®における細胞調製方法や手順については、こちらをご覧下さい。　4D-Nucleofector®簡易マニュアル

【Case 1】細胞株　最適化プロトコルなし　「導入実績データベース」におけるデータなし　Cell Line Optimization

導入したい細胞のプロトコルや実績データのご用意がロンザない場合でも、以下のプログラム最適化の流れに則って、ご自身の遺伝子導入実験にベストのNucleofector®プログラムを探し出してみて下さい。

STEP1：Full Optimization

導入したい細胞のプロトコルや実績データのご用意がロンザない場合でも、以下のプログラム最適化の流れに則って、ご自身の遺伝子導入実験にベストのNucleofector®プログラムを探し出してみて下さい。最適化を実施する際の導入基質は必ず各キット内容品のpmaxGFPベクターをご利用下さい。

Cell Line Full Optimizationに使用するキットおよびプログラム数

	4D-Nucleofector® X Unit	4D-Nucleofector® Y Unit	96-well Shuttle® Device	Nucleofector® I/II/2b Device
Nucleofector® Kit	Cell Line Optimization 4D-Nucleofector® X Kit [V4XC-9064]	Primary Cell Optimization 4D-Nucleofector® Y Kit [V4YP-9A48]	Cell Line Optimization 96-well Nucleofector® Kit [V4SC-9096]	Cell Line Optimization Nucleofector® Kit [VCO-1001N]
最適化プログラム数	16プログラム x 3種試薬	12プログラム x 2種試薬	32プログラム x 3種試薬	7プログラム x 2種試薬

プロトコルリスト　Cell Line Full Optimization

	4D-Nucleofector® X Unit	4D-Nucleofector® Y Unit	96-well Shuttle® Device	Nucleofector® I/II/2b Device
Cell Line Optimization	4DX Cell Line Optimization (SE SF SG)	4DY Optimization (AD1 AD2)	96-well Shuttle® Cell Line Optimization (SE SF SG)	Amaxa™ Cell Line Optimization

STEP2：Fine Tuning （4D-Nucleofector® X Unitおよび96-well Shuttle® Deviceのみ対応）

STEP1のFull Optimizationで15種類のプログラムを実施後、遺伝子導入効率および細胞生存率が良好なプログラムを選定し、下記表を基にSTEP2 Fine Tuningを実行して、ベストなプログラムを探して頂くことをお奨めします。Fine Tuningでは、最適化プログラム15種をベースとして、導入効率を向上させるためのプログラム4種および細胞生存率を向上させるためのプログラム4種をご用意しています。

【Case 2】初代細胞　最適化プロトコルなし　「導入実績データベース」におけるデータなし Primary Cell group-specific Optimization

初代細胞における最適化では、試薬とプログラムがある程度まで絞り込まれ、さらに簡単に目的細胞の最適プログラムを調べることができます。最適化を実施する際の導入基質は必ず各キット内容品のpmaxGFPベクターをご利用下さい。

Primary Cell group-specific Optimizationに使用するキットおよびプログラム数

	4D-Nucleofector® X Unit	4D-Nucleofector® Y Unit	96-well Shuttle® Device	Nucleofector® I/II/2b Device
Endothelial cells (mammalian)	P5 X Kit S [V4XP-5032] 8プログラム	AD1 4D-Nucleofector® Y Kit [V4PY-1A24] 8プログラム	P5 X Kit [V4SP-5096] 8プログラム	Basic Nucleofector® Kit for Endothelial Cells [VPI-1001] プログラム
Epithelial cells (mammalian)	P1 X Kit S [V4XP-1032] P3 X Kit S [V4XP-3032] 8プログラム x 2種試薬	下記 Full Optimizationを参照	P1 X Kit [V4SP-1096] P3 X Kit [V4SP-3096] 8プログラム x 2種試薬	Basic Nucleofector® Kit for Epithelial Cells [VPI-1005] 6プログラム
Fibroblasts (mammalian)	P2 X Kit S [V4XP-2032] P3 X Kit S [V4XP-3032] 8プログラム x 2種試薬	下記 Full Optimizationを参照	P2 X Kit [V4SP-2096] P3 X Kit [V4SP-3096] 8プログラム x 2種試薬	Basic Nucleofector® Kit for Fibroblasts [VPI-1002] 6プログラム
Glial cells (mammalian)	P3 X Kit S [V4XP-3032] 8プログラム	下記 Full Optimizationを参照	P3 X Kit [V4SP-3096] 8プログラム	Basic Nucleofector® Kit for Glial Cells [VPI-1006] 6プログラム
Neurons (mammalian)	P3 X Kit S [V4XP-3032] 8プログラム	AD1 4D-Nucleofector® Y Kit [V4PY-1A24] 8プログラム	P3 X Kit [V4SP-3096] 8プログラム	Basic Nucleofector® Kit for Neurons [VPI-1003] 6プログラム
Smooth muscle cells (mammalian)	P1 X Kit S [V4XP-1032] 7プログラム	下記 Full Optimizationを参照	P1 X Kit [V4SP-1096] 7プログラム	Basic Nucleofector® Kit for Smooth Muscle Cells [VPI-1004] 6プログラム
Stem cells (human)	P3 X Kit S [V4XP-3032] P4 X Kit S [V4XP-4032] 8プログラム x 2種試薬	下記 Full Optimizationを参照	P3 X Kit [V4SP-3096] P4 X Kit [V4SP-4096] 8プログラム x 2種試薬	Human Stem Cell Nucleofector® Starter Kit [VPH-5002] 6プログラム x 2種試薬

プロトコルリスト　Primary Cell group-specific Optimization

	4D-Nucleofector® X Unit	4D-Nucleofector® Y Unit	96-well Shuttle® Device	Nucleofector® I/II/2b Device
Endothelial cells (mammalian)	4DX Basic Endothelial cells (P5 Solution)	4DY Basic Endothelial cells (AD1 Solution)	96-well ShuttleTM Basic Endothelial cells (P5 Solution)	Amaxa™ Basic Endothelial
Epithelial cells (mammalian)	4DX Basic Epithelial cells (P1 P3 Solution)	下記 Full Optimizationを参照	96-well ShuttleTM Basic Epithelial cells (P1 P3 Solution)	Amaxa™ Basic Epithelial
Fibroblasts (mammalian)	4DX Basic Fibroblasts (P2 P3 Solution)	下記 Full Optimizationを参照	96-well ShuttleTM Basic Fibroblasts (P2 P3 Solution)	Amaxa™ Basic Fibroblasts
Glial cells (mammalian)	4DX Basic Neurons (P3 Solution)	下記 Full Optimizationを参照	96-well ShuttleTM Basic Neurons (P3 Solution)	Amaxa™ Basic Glial
Neurons (mammalian)	4DX Basic Neurons (P3 Solution)	4DY Basic Neurons (AD1 Solution)	96-well ShuttleTM Basic Neurons (P3 Solution)	Amaxa™ Basic Neurons
Smooth muscle cells (mammalian)	4DX Basic Smooth Muscle cells (P1 Solution)	下記 Full Optimizationを参照	96-well ShuttleTM Basic Smooth Muscle cells (P1 Solution)	Amaxa™ Basic Smooth Muscle
Stem cells (human)	4DX Basic Human Stem cells (P3 P4 Solution)	下記 Full Optimizationを参照	96-well ShuttleTM Basic Human Stem cells (P3 P4 Solution)	Amaxa™ Human Stem cell

Primary Cell group-specific Optimization以外の初代細胞タイプの最適化を実施する際は、下記のようにFull Optimizationを実施するようにして下さい。最適化を実施する際の導入基質は必ず各キット内容品のpmaxGFPベクターをご利用下さい。

Primary Cell Full Optimizationに使用するキットおよびプログラム数

	4D-Nucleofector® X Unit	4D-Nucleofector® Y Unit	96-well Shuttle® Device	Nucleofector® I/II/2b Device
Nucleofector®　Kit	Primary Cell Optimization 4D-Nucleofector® X Kit [V4XP-9096]	Primary Cell Optimization 4D-Nucleofector® X Kit [V4YP-9A48]	Primary Cell Optimization 96-well Nucleofector® Kit [V4SP-9096]	お問合せ下さい
最適化プログラム数	16プログラム x 5種試薬	12プログラム x 2種試薬	32プログラム x 5種試薬	お問合せ下さい

プロトコルリスト　Primary Cell Full Optimization

	4D-Nucleofector® X Unit	4D-Nucleofector® Y Unit	96-well Shuttle® Device	Nucleofector® I/II/2b Device
Primary Cell Optimization	4DX Primary cell Optimization (P1 P2 P3 P4 P5)	4DY Optimization (AD1 AD2)	お問合せ下さい	お問合せ下さい

【Case 3】　最適化プロトコルなし　「導入実績データベース」におけるデータあり

「導入実績データベース」には、細胞タイプ毎にユーザー情報を基にした遺伝子導入実績が記載されています。最適化プロトコルがない場合は、Optimizationを実施頂くことが望ましいのですが、ユーザーデータを基に導入実験を行って頂く事も可能です。ユーザーデータを踏襲する際には、遺伝子導入成功の可能性を広げるために周辺プログラムの同時評価もお奨めしています。詳しくはテクニカルサポートまでお問合せ下さい。

4D-Nucleofector®における細胞調製方法や手順については、こちらをご覧下さい。　4D-Nucleofector®簡易マニュアル