細胞機能
PDELight™ HTS cAMPホスホジエステラーゼアッセイ
PDELight™ HTS cAMPホスホジエステラーゼアッセイキットは、ホスホジエステラーゼ活性の阻害物質の特定およびIC50測定のためのハイスループットスクリーニング向けに設計された、汎用的なアッセイです。このアッセイでは、ホスホジエステラーゼによって、cAMPから加水分解により産出されるAMPを定量するために、安定かつ高感度なルシフェラーゼベースの生物発光システムを採用しています。AMPは直接ATPへ変換され、変換されたATPの分子のひとつひとつに対し、ほぼ1光子に近い光が放出されます。アッセイは、高感度かつ安定であり、再現性があります。他のホスホジエステラーゼアッセイとは異なり、PDELight™キットは放射線、ビーズ、修飾基質、抗体を必要としません。
利点
- 容易 – 1種類の試薬の添加による反応で測定結果の読み取りが可能
- 汎用プラットフォーム – すべてのcAMP依存性ホスホジエステラーゼに使用可能
- 迅速なアッセイ – 3分未満で384ウェルプレートのアッセイを完了
- 感度 – 96ウェル、384ウェル、または1536ウェル形式で酵素を使用可能
- 再現性のある、安定なアッセイ – 標準的なZ ‘ 値>0.8、わずかな誤差、優れた感度
用途
- cAMP依存性ホスホジエステラーゼ活性スクリーニング
- IC50測定
仕様
- AMP範囲:<10 nM~20 μM
- ホスホジエステラーゼ:cAMPホスホジエステラーゼ
- 再現性:標準的な変動係数(CV)は5%未満、標準的なZ ‘値は0.8超
- アッセイ時間:1プレートあたり3分未満
2℃ – 8℃, 凍結不可
PDELight™ キットプロトコル |
高い再現性とバックグランドに対する高シグナル比 |
同一サンプルの複数回計測によるシグナルとバックグランド。高い再現性が示された。Z’ 値は、0.8より大きく、優れたシグナル/バックグランド S/N比が得られた。 |
AMP検出の直線性 |
PDELight™ キットは、ホスホジエステラーゼにより産生される AMP を定量する。PDELight™ 検出試薬は、20 μM までの AMP を定量し、cAMP による影響を受けない。 |
PDELight™ アッセイキットによる IC50 値の迅速スクリーニング |
上図:PDELight™ キットを用いた化合物ライブラリーのスクリーニング。MMPX と3-IBMX が10 μM で50% 以上の阻害活性をもつ、ホスホジエステラーゼ阻害剤として同定された。 下図:3-IBMX の IC50 測定。PDELight™ キットによって、IC50=6.2 μM と測定された。 |